红花黄色素与双亚酸的抗血栓作用

杨晓君，穆合塔尔，包晓玮，郭雪婷，陈 潇

(1.新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830054；2.新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆 乌鲁木齐 830052)

血栓形成是许多缺血性疾病的生理基础，抑制血小板的聚集与释放、抑制凝血酶系统、激活抗凝血酶及纤溶酶系统均可抑制血栓的形成[1-3]。红花系菊科红花属植物红花(Carthmus tinctorinsL.)的干燥管状花[4]。红花黄色素(SY)是红花的主要有效成分[5]，其中羟基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A，HSYA)是红花发挥药理作用的主要物质[6-9]。现代研究表明，红花黄色素具有扩张血管、改善心肌供血、抑制血小板聚集、抗氧化等多种药理作用，适用于冠心病、血管栓塞性疾病、高血压、脑梗塞并发症等[10]。红花黄色素也是世界卫生组织允许鼓励使用的天然食用色素之一[11]，是理想的食品添加剂。红花籽油的亚油酸含量是所有已知植物中最高的，号称“亚油酸之王”。亚油酸、α-亚麻酸是人体必需脂肪酸，具有软化血管作用，主要功效是降血脂和抗血栓、预防动脉粥样硬化等[12]。

本实验将红花不同部位的化学成分——红花黄色素和亚油酸、亚麻酸进行合并后使用，观察其单用及合并使用的抗血栓作用，为开发红花新产品——红花黄色素软胶囊提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

清洁级昆明种小鼠，体质量18～22g，雌雄各半；清洁级SD大鼠，体质量200～250g，雄性，均由新疆维吾尔自治区实验动物研究中心提供。

双亚酸即含有40%红花籽油与60%亚麻酸，由新疆医科大学药学院提供；红花黄色素 新疆宏展中药科技有限公司。

尿激酶 天津生物化学制药有限公司；TXB2放免试剂盒、6-Ke-PGF1a放免试剂盒、PGE2放免试剂盒北京永辉生物科技有限公司。

BL 1500电子天平 北京赛多利斯公司；分析天平梅特勒-托利多(上海)仪器厂；3Sigma K30 低温高速离心机、全贝克自动生化分析仪 美国Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠血栓块的溶解率检测

使用健康昆明种小鼠80只，依体质量随机均分为8组，每组10只，雌雄各半。取其中一组小鼠，每只取血1mL，待凝固后，用生理盐水洗60min后，将血凝块烘干后称质量得m，求算平均m值。另用同法取血漂洗，将凝块直接置于冻存管中分别加入SY、双亚酸、合并后低剂量、中剂量和高剂量药液各2mL，给药剂量见表1，阳性对照组加入等体积的尿激酶，对照组加入等体积的生理盐水。于37℃保温箱中保温1、2、4、6、8h后，将凝块取出，用生理盐水洗60min后，烘干称质量得m1，计算血凝块的溶解率。

1.2.2 对大鼠血浆TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影响

将60只大鼠随机分为实验组和对照组，每组10 只，自由摄食、饮水2d后，每只大鼠颈静脉取血，分离血浆，－20℃冻存，第2天，实验组大鼠按1mL/100g剂量每日灌胃SY、双亚酸，合并后低、中、高剂量药液，给药剂量见表1，每只大鼠按250g计，折合灌胃剂量为2.5mL/(d·只)，对照组灌胃等量的生理盐水。每天灌胃，20d后，每只大鼠颈静脉取血、抗凝、分离血冻，－20℃冻存。然后，按TXB2、6-Ke-PGF1A、PGE2试剂盒方法测定各组大鼠血浆TXB2、6-Ke-PGF1A、PGE2的含量。

表1 各给药组剂量Table 1 Dosages of each experimental groups g

1.3 数据统计

2 结果与分析

2.1 对小鼠血栓块溶解率的影响

表2 对小鼠血栓块溶解率的影响(±s，n=10)Table 2 Effect of dual sub-acid, safflor yellow and combination on dissolving rate of blood clots in rats (±s，n=10)

表2 对小鼠血栓块溶解率的影响(±s，n=10)Table 2 Effect of dual sub-acid, safflor yellow and combination on dissolving rate of blood clots in rats (±s，n=10)

注：*.与对照组比较，差异较显著(P＜0.05)；**.与对照组比较，差异显著(P＜0.01)；***.与对照组比较，差异极显著(P＜0.001)。

组别 给药剂量 溶解率/%对照组 2.93±1.66阳性对照组 0.5U/mL 11.87±0.61***SY组 27.6mg/mL 5.94±0.91*双亚酸组 28mg/mL 6.82±2.95**合并后低剂量组 39mg/mL 8.20±1.33***合并后中剂量组 55.6mg/mL 6.91±1.70**合并后高剂量组 97mg/mL 7.17±1.10***

由表2可见，与对照组比较，各实验组血凝块的溶解率均明显增加，红花黄色素与双亚酸合并后剂量组作用强于红花黄色素和双亚酸单一组分，其中合并后低剂量组的溶解率最高，且血凝块的溶解率不随剂量的增加而增大。与对照组比较，尿激酶阳性对照组有显著的溶解血栓作用。红花黄色素能抑制血小板聚集，防止血栓形成；亚油酸、α-亚麻酸具有一定抗血栓作用，实验结果表明，将二者合并使用，抗血栓作用优于单用，体现了二者抗血栓作用的共性。合并后低剂量组的血栓块溶解率最高，提示红花黄色素软胶囊中，红花黄色素的用量有待进一步探讨。

2.2 对大鼠血浆TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影响

表3 对大鼠血浆TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影响(±s，n=10)Table 3 Effects of dual sub-acid, safflor yellow and combination on TXB2, 6-Ke-PGF1a and PGE2 in rats( ±s，n=10)

表3 对大鼠血浆TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影响(±s，n=10)Table 3 Effects of dual sub-acid, safflor yellow and combination on TXB2, 6-Ke-PGF1a and PGE2 in rats( ±s，n=10)

组别 灌胃剂量/(mg/(kg·d)) TXB2/(pg/mL) PGE2/(pg/mL) 6-Ke-PGF1α/(pg/mL)对照组 5.42±1.28 28.45±4.74 61.35±9.51 SY 276 4.92±2.07 20.36±3.42** 67.50±8.50双亚酸 280 5.19±1.42 22.13±2.47** 62.00±17.54合并后低剂量 390 4.89±1.41 28.15±2.17 83.38±10.66***合并后中剂量 556 5.07±2.03 26.98±5.01 76.54±10.91合并后高剂量 970 3.23±1.41* 20.26±3.64*** 69.34±9.03

由表3可见，与对照组比较，各给药组均能使TXB2含量下降，其中合并后高剂量组使TXB2含量下降显著，有统计学意义(P＜0.05)；各给药组均能使PGE2含量下降，其中合并后高剂量组有统计学意义(P＜0.001)；各给药组均能使6-Ke-PGF1a含量升高，其中合并后低剂量组有统计学意义(P＜0.001)，且合并后各剂量组对6-Ke-PGF1a含量升高效果优于单用红花黄色素和双亚酸组。实验结果表明红花黄色素、双亚酸及合并使用均能降低TXB2和PGE2含量，升高6-Ke-PGF1a含量，从而维持TXA2与前列环素(PGI2)间平衡，促进血管扩张，抑制血栓形成。

3 讨 论

红花黄色素、双亚酸及合并后低、中、高剂量组体外对小鼠血凝块均具有较好的溶解作用，且合并后低剂量组作用最佳，无剂量依赖关系。

TXA2和PGI2均为花生四烯酸(AA)的环加氧酶代谢产物，TXA2具有很强的致血小板聚集作用，而PGI2则具有较强的抗聚集效应，二者呈生理拮抗关系[13]。PGE2能收缩血管，TXB2和6-Ke-PGF1a分别为TXA2和PGI2的稳定代谢产物，其含量高低与TXA2和PGI2量含量一致。TXA2/PGI2比值升高易导致血小板聚集、血栓形成，促进动脉粥样硬化和冠心病。各给药组均能降低大鼠血浆TXB2与PGE2的含量；增加6-Ke-PGF1a的含量，其中红花黄色素与双亚酸合并后对PGE2的影响呈明显的量效关系，作用强于红花黄色素和双亚酸单用，具有抗血小板聚集作用。该结果提示，红花黄色素与双亚酸合并使用能维持TXA2-PGI2间的平衡，促进血管扩张，抑制血小板聚集从而抑制血栓形成。红花黄色素与双亚酸合并后的抗血小板聚集作用可能是抑制内源性AA释放，从而减少TXA2生成所致。PGE2能够收缩血管，因此它的含量降低可使血栓形成减少。

血管内血栓的形成是产生冠心病和脑血栓等心血管疾病的主要原因[14-15]，发病率呈上升趋势，已经严重威胁人类健康。因此，抗血栓产品的研究已成为当今的研究热点之一。红花黄色素与双亚酸合并后制剂的研究能为开发出新的口服制剂——红花黄色素软胶囊提供一定的参考。

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