六君丹参颗粒对自发性高血压大鼠心血管重塑干预作用的实验研究*

黄汉超 黄 琳 吴永刚 黄雪君 杜铁良

（广东省第二中医院，广东 广州 510250）

本研究拟采用自拟六君丹参颗粒对合并有动脉粥样硬化的自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）进行干预，观察其对心血管重塑的干预作用并推测可能的作用机制，试图明晰健脾活血化痰法在治疗高血压合并动脉粥样硬化的价值和地位。

1 材料与方法

1.1 动物 SHR8周龄SPF级雄性，购自北京维通利华公司，编号：SCXK（京）2002-0003，共 50 只，平均体质量 203.62g。所有大鼠在广东省第二中医院中医研究所SPF级实验室内进行饲养，实验室许可证编号：SYXK（粤）2005-0059，饲料由广东省医学实验动物中心提供。

1.2 药物 六君丹参颗粒配方：陈皮、法半夏、党参、茯苓、白术、甘草、丹参、檀香、水蛭、砂仁，剂量分别相当于生药6、10、10、10、10、3、10、3、3、3g。

1.3 仪器与试剂 无创血压检测仪，澳大利亚powerlab8/30；飞鸽牌AnKeTDL-5-A款离心机；722光栅分光光度计；酶标检测仪，美国伯乐公司Bio-RAD680；Motic6.0数码医学图像分析系统。谷丙转氨酶试剂，批号20 100408；谷草转氨酶试剂，批号20 100408；尿素氮试剂，批号20 100408；肌酐试剂，批号20 100408；由南京建成生物制品有限公司提供。基质金属蛋白酶-2、9（MMP-2、9）试剂盒由上海沪尚生物科技有限公司提供，批号：20100925。

1.4 分组与给药 50只SHR分为实验组和对照组，每组各25只，实验组大鼠予六君丹参颗粒灌胃，每日2次，每次5mL，对照组予等剂量蒸馏水灌胃，每日2次。两组共计给药12周。

1.5 标本采集与检测 （1）血压监测：各组取8只大鼠，在麻醉状态下，用37℃温水对其尾巴进行反复擦拭，使尾巴血管充分扩张，其后接血压探头于尾巴上，根据相应的操作指示进行检测，每次测3个读数，取平均值。（2）血液指标：大动脉采血约5mL后行离心，取上层血清进行相关的指标检测。（3）动脉病理学切片检查：处死8只大鼠，取胸主动脉，生理盐水冲洗干净后予35%甲醛溶液固定，每条动脉取5个横切面，选取标准横切面的切片进行光镜观察，检测动脉管壁病理变化及中膜厚度与血管半径之比。（4）心肌电镜检查：取出心脏，用生理盐水冲洗干净，在大鼠心尖部用无菌手术刀片横切厚约1mm左右的薄片，用2.5%戊二醛固定液固定后进行电镜检查。

2 结 果

2.1 两组血压及体质量比较 见表1。随着大鼠周龄增加，两组收缩压有上升趋势，并均于20周时达到最高值，各组间比较分析，第12周起实验组收缩压较对照组收缩压有下降趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）；至第20周，实验组收缩压及舒张压较对照组收缩压明显下降 （P＜0.05）。两组大鼠体质量均有增加，但组间及组内比较无显著差异。两组大鼠在饲养、给药期间均无一死亡。

表1 两组血压比较（mmHg，）

表1 两组血压比较（mmHg，）

与对照组比较，*P＜0.05。

组 别 n 收缩压 舒张压12周 16周 20周 12周 16周 20周实验组8 186.23±8.24 188.38±8.26186.72±9.82* 110.62±9.54 112.74±10.91 112.61±8.87*对照组8 187.16±9.89 194.16±7.66 208.51±4.89 109.53±11.14 110.87±12.82 109.38±11.03

2.2 不同时间段大鼠管腔面积（LA）与管壁面积（WA）及主动脉中膜厚度与管壁半径变化 见表2。和对照组相比，治疗组的LA/WA有提高的趋势，第20周时，差异具有统计学意义 （P＜0.05）。中膜厚度在治疗第16周时即明显缩小（P＜0.05），并且随着治疗时间的延长，效果越显著。

2.3 不同时间段大鼠血清MMP-2、MMP-9水平变化 见表3。两组各时间段MMP-2、MMP-9水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 两组LA与WA及主动脉中膜厚度与管壁半径比较（n=8，）

表2 两组LA与WA及主动脉中膜厚度与管壁半径比较（n=8，）

与对照组同时段比较，△P＜0.05。

组 别 LA（mm2） WA（mm2） 中膜厚度（μm） 管腔半径（mm）实验组12 周 2.31±0.74 0.89±0.53 118.36±10.22 0.62±0.01 16 周 2.62±0.62 0.82±0.25 116.62±11.52△ 0.86±0.04 20 周 3.02±0.54△ 0.74±0.16△ 115.62±9.53△ 1.02±0.02对照组12 周 2.23±0.89 0.91±0.45 116.42±11.12 0.61±0.06 16 周 2.56±0.92 1.01±0.63 120.64±9.21 0.83±0.04 20 周 2.71±0.62 1.17±0.38 122.61±8.53 0.92±0.02

表3 两组各时段MMP-2、MMP-9水平检测（ng/mL，）

表3 两组各时段MMP-2、MMP-9水平检测（ng/mL，）

组 别 n MMP-2 MMP-9 12周 16周 20周 12周 16周 20周实验组 8 34.52±9.81 44.39±5.99 57.62±10.13 28.12±7.88 34.91±10.52 41.63±8.47对照组 8 36.92±10.68 48.21±9.21 60.52±9.38 25.11±6.94 35.62±8.52 44.68±9.61

2.4 大鼠主动脉病理切片及心肌电镜图比较 对照组病理切片提示中膜弹性纤维排列紊乱中膜胶原纤维增生；实验组中膜弹性纤维较前排列有序，胶原纤维增生较前大鼠明显减轻，见图1。实验组在治疗前，心肌纤维排列疏松、分离，线粒体集聚，心肌线粒体空泡发，见图2。实验组在用药后，心肌纤维排列较治疗前变得整齐，线粒体体大小一致，少许空泡发，见图3。

图1 大鼠主动脉病理切片图（HE染色，×100倍）

图2 实验组用药前心肌电镜图

图3 实验组用药后心肌电镜图

2.5 安全性指标检测 见表4。第12周查血进行安全性指标检测，结果两组比较差异无统计学意义（P＜0.05）。

表4 两组安全性指标检测比较（）

表4 两组安全性指标检测比较（）

尿素氮（μmol/L）治疗组 8 19.32±10.16 30.21±4.68 37.81±11.85 18.82±4.52对照组 8 12.61±8.72 35.61±6.42 43.62±9.83 20.55±5.85组 别 n 谷丙转氨酶（U/L）谷草转氨酶（U/L）肌酐（μmol/L）

3 讨 论

高血压是临床的常见病之一，该病常伴发的心、脑、肾等靶器官损害。近年来研究表明，靶器官的损害与心脏和血管重塑有密切关系，血管重塑将使血管阻力进一步增加，管腔变窄，并继而引起或加重靶器官的损害。因此对血管重塑的干预性研究已成为国际上高血压研究的热点之一。SHR为常用的动物模型之一，与人类原发性高血压形成机制有相似之处，对SHR的形态计量学检测证明：阻力血管的结构性改变甚至在高血压形成之前已经出现，因此血管重塑可能贯穿高血压发病的始终，是高血压发病的主要机制之一，能有效逆转血管重塑将有助于减缓高血压的进程［1］。中医药对高血压心血管重塑的干预性研究尚不多，在已有的研究表明，在动脉硬化的形成、发生、发展过程之中，痰浊、血瘀是重要的病理产物和致病因素之一，脾气亏虚又是其根本的病机之一［2-3］。

血管重构是一个动态过程，包括细胞的增殖、迁移、凋亡以及基质成分的合成、降解、重新排列等过程。血管重构又是血管对刺激所产生的复杂的动态反应过程，包括信号的感受、转导和调节因子的合成、释放，最后产生结构的变化，其机理比较复杂［4］，目前尚未有完全了解清楚。从实验结果来看，自发高血压模型大鼠的心血管重构事件均表为胶原纤维的增生，有研究表明［5-6］，高血压时血管结构的改变主要机制为动脉血管中膜平滑肌细胞增殖/凋亡失衡，胶原降解制衡，从而出现肥大、增生以及结缔组织增加等，其结果是血管壁增厚，壁腔比例明显加大，血流阻力和血管反应性增加，血管顺应性下降，使重要组织脏器如心、肾等缺血、缺氧，并继而诱发器官的重塑。

六君丹参颗粒由陈夏六君子汤配伍丹参饮、水蛭构成，临床上具有健脾益气、活血化瘀的功效。既往已有该方面的的中医药科研多为运用平肝潜阳等方剂进行研究，健脾活血化痰作为主流治法的研究尚不多。本动物实验研究表明，六君丹参颗粒具有显著的具有逆转血管重构的作用，同时对重要脏器如心脏的重构也有良好的干预作用，电镜（图2）显示心肌纤维排列有改善，线粒体形态回复正常，提示该药对受损的心肌有良好的修复作用，并且安全有效。MMP-2、9是MMPs家族中的明胶酶系，表达于体内各种细胞和组织之中，包括血管平滑肌和内皮细胞，参与生理重塑、组织修复和血管新生，在高血压病心血管的重塑之中扮演着重要角色［7-8］。研究表明抑制该两种酶可降低胶原含量，抑制间质纤维化，有助于逆转血管重塑［9-10］。但检测提示与对照组相比差异无统计学意义，提示该药对血管重塑的逆转作用并非通过抑制MMP-2、9而起作用，因此其机制尚需进一步探讨。

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