分光光度法测定肝病患者血浆中吲哚菁绿的滞留率

郝燕勤，邹继红

（赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000）

分光光度法测定肝病患者血浆中吲哚菁绿的滞留率

郝燕勤，邹继红

（赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000）

目的：采用分光光度法测定肝癌和肝硬化患者血浆中吲哚菁绿的滞留率.方法：采用分光光度法，检测波长为805 nm.结果：肝癌及肝硬化患者血浆中吲哚菁绿的滞留率均大于10％.结论：所用方法简便、快速、准确，适用于肝癌和肝硬化患者血浆中吲哚菁绿滞留率的测定，可以为患者是否施行肝脏切除术提供可靠数据.

分光光度法；吲哚菁绿；肝病；含量测定

吲哚菁绿（indocyanine green，ICG）是一种合成的三羧基花青类红外感光染料，又称靛青绿，1955年由美国柯达实验室研制成功，1956年Fox等首先将其应用于肝功能及循环功能检查，1970年以后广泛应用于眼科血管造影[1].吲哚菁绿进入血液后可与血清蛋白结合，选择性地被肝细胞摄取，以游离形式随胆汁排泄至肠.ICG具有不参与肠肝循环，无肝外代谢，无肾脏排泄，在肝细胞内无结合，几乎无毒副作用等特点.很多学者将ICG 15min滞留率试验（ICG R15）作为反映肝血流量与主动转运机能，了解肝储备功能的一项敏感指标.针对赤峰学院附属医院在2010年至2011年期间收治的肝病患者，笔者采用分光光度法测定肝癌及肝硬化患者血浆中的吲哚菁绿的滞留率，为临床医师施行肝切除术提供理论依据.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

UV-765紫外-可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLER AE240电子天平（瑞士梅特勒公司）；L80-2离心沉淀机（上海跃进医疗器械厂）.注射用吲哚菁绿（丹东医创药业有限责任公司，批号：20100701）；生理盐水（赤峰荣济堂药业有限公司，批号：20100902）；水为蒸馏水.

1.2 方法与结果

1.2.1 对照品溶液的制备

精密称取注射用吲哚菁绿10.4mg，置100mL量瓶中，用水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得104mg·L-1的吲哚菁绿对照品溶液.

1.2.2 线性范围的考察

分别精密吸取 1.0、2.0、3.0、5.0、10.0mL吲哚菁绿对照品溶液，置100mL量瓶中，再立刻加入0.5mL空白血浆，混匀，用水稀释至刻度，即得系列浓度的吲哚菁绿对照品溶液.分别准确吸取上述各浓度溶液 1.0mL，放入 A、B、C、D、E 五个 10mL试管中，各加入1.0mL生理盐水，充分混匀.将1.0mL蒸馏水、1.0mL生理盐水和1.0mL正常血浆混匀，作为空白对照溶液.在805nm波长处，分别测定各管的吸光度.以浓度（mg·L-1）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为:Y=0.0946X+0.0105，（r=0.9995）.结果表明：吲哚菁绿的浓度在1.04～10.4mg·L-1范围内与吸光度具有良好的线性关系.

1.2.3 血浆样品的制备

肝病患者早晨空腹，安静取平卧位.自肘静脉采血5mL，置经肝素处理的离心管中，混匀，以3000r·min-1的转速离心10min，取上清液作为空白血浆.同时，以5mL注射用水溶解25mg注射用吲哚菁绿，按每公斤体重取0.5mg的吲哚菁绿溶液，自肘静脉在30s内注入.准确计时，静注后15min自另一肘静脉采血5mL，置经肝素处理的离心管中，混匀，以 3000r·min-1的转速离心 10min，取上清液作为测定样品.

1.2.4 样品的测定

准确吸取上述空白血浆和测定样品各1.0mL，分别加入2mL生理盐水，充分混匀，在805nm处，以空白血浆为空白调节分光光度计的零点，然后测定样品吸光度，由标准曲线求出其浓度，计算吲哚菁绿的血中平均滞留率，结果见表1.

表1 吲哚菁绿血中平均滞留率测定结果

2 讨论

以分光光度计扫描吲哚菁绿溶液，其最大吸收波长为805nm，故选取检测波长为805nm.由于吲哚菁绿遇光易分解，因此在静脉注射和抽血时，速度要快，而且要避光操作.采用紫外-可见分光光度法测定样品浓度时同样需要避光操作，以减少测量误差.

〔1〕张承芬，陈有信.开展吲哚菁绿脉络膜血管造影研究，提高眼底病临床诊治和研究水平[J].中华眼底病杂志，1988，14（2）:66-67.

〔2〕王伟，陈秀文，吴岩.肝脏储备功能检测要点及护理干预效果 [J].吉林医学，2009，30（20）：2438-2439.

〔3〕王钝，金文淑，秦恩伟，等.吲哚菁绿的合成[J].中国医药工业杂志，2006，37（9）：584-585.

〔4〕杨亚英，张霁.吲哚菁绿潴留试验评估肝储备功能与护理操作[J].重庆医学，2002，31（4）：316-317.

〔5〕孙文兵，李昆，陈莉，等.吲哚菁绿潴留率 15在可切除性肝癌外科治疗中的意义[J].中华肝胆外科杂志，2002，6（1）：62-63.

〔6〕高文涛，黎一鸣，吉鸿，等.联合测定叫噪著绿和一山梨醇评价肝储备功能[J].中华肝胆病杂志，2003，11（6）：350-353.

R927.2

A

1673-260X（2012）01-0057-02