某规模化猪场猪布鲁氏菌病血清学调查

刘 建， 汤德元*，曾智勇，罗险峰，李春燕，甘振磊，王 凤，郝 飞

（ 1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550008）

布鲁氏菌病又称布氏杆菌病，是由布氏杆菌引起的一种人畜共患病，病畜临床主要表现为生殖器官和胎膜发炎，引起流产、睾丸炎、腱鞘炎和关节炎[1]。在家畜中主要感染牛、绵羊、山羊、猪等，并且可以通过这些家畜传染给人及其他动物。本病在世界范围内广泛分布，对畜牧业发展和人类健康有极大的危害，世界动物卫生组织(OIE)将其列为重要传染病，我国将其列为乙类传染病[2]。自上世纪六七十年代起我国通过对高危人群和家畜进行疫苗防治，布鲁氏菌病在80年代末至90年代初曾得到较好控制[3]；但之后布氏杆菌病感染率呈现出逐渐上升的势头：1991－2001年间，通过对共计2.20万份人的血清学调查显示，布氏杆菌感染阳性率由90年代初的0.35%上升至2001年的3.57%，这一结果也间接反映了家畜布氏杆菌感染率逐年上升的事实[4]。因此，为了解贵州省某规模化猪场猪布鲁氏菌病的流行状况，本实验对该规模化猪场进行了猪布鲁氏菌病的血清学检测，以期为该规模化猪场猪布鲁氏菌病的防治提供参考依据。现将检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清

采自贵州省某规模化养猪场经产母猪血清样本500份、后备母猪血清样本200份及公猪血清样本100份，共计800份。

1.1.2 诊断液

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原、标准阳性血清及标准阴性血清，由青岛易邦生物工程有限工司生产，批号为20120409；布氏杆菌病试管凝集抗原，购自农业部动物检疫所。

1.2 方法

1.2.1 检测方法

1）布鲁氏菌虎红平板凝集试验：按照农业部颁发的《中华人民共和国国家标准动物布鲁菌病诊断技术》中规定的技术要求进行操作，待检血清通过布鲁氏菌虎红平板凝集试验(RBPT) 进行初筛。取一洁净的玻璃板，其上划分成4 cm2的方格，在该玻璃板上标记各受检猪血清号，然后吸取相应的待检血清 0.03 mL 滴于洁净玻璃板上，在受检血清旁加入 0.03 mL 虎红平板凝集试验抗原，混匀后4 min内观察结果，同时设置阴、阳性血清对照。阳性或疑似阳性的样品用布鲁氏菌试管凝集试验方法进行复检确认。

2）布鲁氏菌试管凝集试验：本试验按《家畜布氏杆菌病试管凝集反应技术操作规程及判定标准》[5]进行。首先稀释血清，稀释度依次为 1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。加入等量稀释后的抗原，混匀，则血清稀释度依次为 1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同时做阴性对照和阳性对照及抗原对照，将全部试管充分震荡后置 37 ℃温箱中 20～22 h，取出后放室温2 h，然后判定结果。

1.2.2 判断标准

1）布鲁氏菌虎红平板凝集试验判断标准：在阴、阳性血清对照成立的条件下，若待检血清在4 min内出现肉眼可见凝集现象都判为阳性（+）；若无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（-）。

2）布鲁氏菌试管凝集试验判断标准：反应结果可见菌体完全被凝集呈伞状沉于底部，液体完全透明，记为“++++”，即100%凝集；菌体大部分被凝集沉于底部，液体不十分透明，记为“+++”，即75%凝集；管底可见到明显的凝集块，液体不甚透明，记为“++”，即50%凝集；液体混浊，有不甚明显的沉淀或仅有沉淀的痕迹，记为“+”，即25%凝集；液体均匀混浊，无凝集物，记为“-”，为阴性反应。以出现“++”，即50%以上凝集判为阳性；25%凝集，判为可疑。

2 结果

由表1可知，该规模化猪场经产母猪、后备母猪和公猪的猪布鲁氏菌病待检血清样品，通过布鲁氏菌虎红平板凝集试验进行初检，阳性份数为10份，阳性率为1.25%；其中公猪检测100份，阳性份数为2份，阳性率为2%， 后备母猪检测200份，阳性份数为5份，阳性率为2.5%，经产母猪检测500份，阳性数为3份，阳性率为0.6%。然后对初检阳性的血清进行布鲁氏菌试管凝集试验进行确诊，结果表明，以上初检阳性血清中最终确诊4份呈现布鲁氏菌阳性，阳性率为0.5%，经产母猪、后备母猪和公猪血清阳性数量分别为2份、1份和1份，阳性率分别为0.4% 、0.5% 和1.0%。

表1 猪布鲁氏菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果

3 结论与讨论

本次试验对贵州省某规模化养猪场经产母猪、后备母猪和公猪共计800份猪血清样本进行了猪布鲁氏菌病的血清学检测，根据结果可以看出，经产母猪、后备母猪和公猪的猪布鲁氏菌病阳性率分别为0.4% 、0.5% 和1.0%。本次试验共计对800份猪血清样品进行布鲁氏菌病检测，整体的阳性率为0.5%，与罗明星等[6]的调查结果基本一致。

目前布鲁氏菌病的诊断和检测技术主要有虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳汁环状试验(MRT)以及PCR诊断技术等[7]。从试验结果可知，用RBPT检测猪布鲁氏菌病，800份血清样品共检测出阳性血清10份，阳性检出率为1.25%，而用SAT检测出阳性血清4份，阳性检出率为0.5%，说明用RBPT检测血清样品存在假阳性现象，因此，RBPT只可用于样品的初步检疫筛选，经RBPT诊断的阳性样品，须进一步做试管凝集试验或其他辅助试验方可定性。SAT是我国布鲁氏菌病诊断的法定方法，是一种比较经典的布鲁氏菌病检测方法。SAT既可以定性，也可以定量，因而在判定反应强度上比 RBPT更精确。RBPT在使用的时候操作方便、快捷，但易出现假阳性，适于大规模样品的初检。SAT 特异性好，准确性高, 但操作繁琐，费时、费力[8]。因此，在实际工作中，对待检血清可采用平板凝集试验初检，对阳性者再用试管凝集试验复检确定，从而可以达到快速准确的目的。本次调查先用RBPT方法进行初筛，再使用SAT方法确诊。2种方法均检出一定比例的阳性率，说明该规模化养猪场确实存在布鲁氏菌的感染，故建议该规模化猪场要加强猪场的免疫、检疫、淘汰和净化力度，以避免布鲁氏菌病蔓延。

布氏杆菌是一种细胞内寄生菌，抗生素对其效果较差。因此，本病应以免疫预防为主。一般认为带菌病畜是该病的主要传染源，病畜可以通过交配、蚊虫叮咬等途径传染健康家畜。对于检查到布氏杆菌的养殖场应采取积极的免疫措施，隔离传染源，控制疫情蔓延，同时对饲养场地、各种用具、车辆等进行消毒，对母畜分娩的排泄物、胎衣所污染的垫草、流产胎衣和胎儿等必须进行无害化处理，对其他未发病家畜及时进行疫苗免疫。布鲁氏菌病是一种人兽共患病，危害性非常大，必须引起高度重视，做好防疫工作。只有高度重视和加强强制性防疫，布鲁氏菌病才可以得到较好的控制。

[1] 蔡宝祥.家畜传染病学[M].4版.北京:中国农业出版社,2001.

[2] 王海霞，陈军光，郑素君，等.检测奶牛布鲁氏菌病试验方法的比较[J].中国兽医杂志，2008,44(2):33.

[3] 崔丽瑾，王兴龙，王英超，等.野生动物布鲁氏菌病[J].中国人兽共患病学报,2010,26(3):283-288.

[4] 张士义，朱岱，压森林.中国布鲁氏菌病防治年回顾[J].中国地方病防治杂志，2003，18（5）:275-278.

[5] 郑明球.家畜传染病学实验指导[M].3版.北京:中国农业出版社，2005:38-44.

[6] 罗明星,周碧君,王开功,等.贵州省家畜布氏杆菌病血清学检测[J].贵州农业科学，2009，37(1):109-110.

[7] 齐景文.布鲁氏菌病常用诊断方法应用现状及评价[J].中国畜牧兽医，2006，33(8):70-73.

[8] 樊三忠，等.虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测奶牛布鲁菌病的比较[J].中国动物检疫，2009，26 (9):52-53.