HPLC法测定补肾强身片中淫羊藿苷的含量

颜春华 魏清榕

（1 丹东市食品药品检验所，辽宁 丹东 118002；2 鞍山市食品药品检验所，辽宁 鞍山 114006）

补肾强身片具有补肾强肾的功效，用于治疗腰酸足软，头晕耳鸣，眼花心悸，阳萎遗精，由淫羊藿、菟丝子、金樱子、女贞子、狗脊五味中药组成。该中成药收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册[1]，标准中无定量指标，不能有效控制其质量。淫羊藿为方中的君药，其主要成分为淫羊藿苷，我们采用HPLC法[2]对方中淫羊藿苷进行含量测定。方法简便、准确，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本Shimadzu公司LC-10ATVP高效液相色谱仪；检测器：SPD-M10AVP；Class-vp工作站；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂）。

1.2 试药

淫羊藿苷对照品：由中国药品生物制品检定所提供，批号为110737-200319（供含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；其它试剂均为分析纯；补肾强身片为市售品（批号为060101，060102，060103）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Diamonsil®（钻石）C18（5μm，250×4.6mm）；流动相：乙睛-水（30∶70）；检测波长：270nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品10.40mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取此液2mL，置5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL含淫羊藿苷41.6μg）。

图1 HPLC色谱图

表1 淫羊藿苷回收率实验结果

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置50mL量瓶中，加稀乙醇30mL，超声处理1h，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，结果见图1A、B。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液2、4、5、6、8mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别吸取各浓度溶液10μL注入液相色谱仪中，测定峰面积，以淫羊藿苷进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得回归方程为：Y=45186.35+6455486.779X，r=0.9999，表明淫羊藿苷在0.0832～0.3328μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 阴性对照试验

按处方比例配制不含淫羊藿的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备，测定，结果在淫羊藿苷对照品吸收峰位置处无干扰（见图1C）。

2.6 精密度试验

分别精密吸取41.6μg/mL的淫羊藿苷对照品溶液10μl，按正文含量测定项下色谱条件，连续进样5次，测定峰面积，结果平均峰面积为1328978，RSD=1.03%。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液分别放置2、4、8、12、16、20、24h测定供试品中淫羊藿苷的峰面积，测得其峰面积的平均值为1385511，RSD为1.23%，表明供试品溶液至少在24h内稳定。

2.8 重现性试验

取同一批号的供试品适量，精密称定6份，按含量测定项下的方法操作，制备供试品溶液，测定供试品中淫羊藿苷的含量，结果平均含量为0.89mg/片，RSD=1.16%。

2.9 回收率试验

取已知淫羊藿苷含量的补肾强身片样品（批号为060103，淫羊藿苷含量为0.90mg/片，平均片重为0.3995g）约1g，精密称定，共计6份，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液（0.1514mg/mL）15mL，按含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定补肾强身片中淫羊藿苷的含量，计算回收率，测定结果见表1。

2.10 样品含量测定

按本质量标准含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批补肾强身片中淫羊藿苷的含量，测定结果分别为0.89、0.92、0.90mg/片。

3 讨 论

流动相的筛选与确定，曾采用不同比例的乙睛-0.05%磷酸溶液，乙睛-水为流动相，进行了试验，结果乙睛-水体积比为30∶70时，供试品中淫羊藿苷与相邻组分分离度良好，故确定为含量测定项下色谱条件。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.中药.中药成方制剂[S].第十五册.1997.

[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典:一部[M].北京:化学工业出版社,2005:6.