大鼠再生障碍性贫血模型制备

额尔敦都楞，布仁巴图，巴图德力根，韩志强，金 花，娜仁其其格，莫日根毕力格

(内蒙古民族大学附属医院，通辽 028007)

AA)是一种获得性骨髓造血功能障碍性疾病，本病发生与骨髓造血干细胞损伤、造血微环境缺陷、免疫性造血抑制及遗传倾向等多种因素有关［1］。我们为了筛选治疗药物，建立复制周期短，稳定，成功率高的AA模型，综合了文献方法［2-3］。对照射 + Cy+CH复合法干预剂量、干预时间进行了对比研究获得了与人类病理改变相似，重复性好的AA大鼠模型。报道如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 化学试剂：环磷酰胺(cyclophosphamide)由山西普德药业有限公司生产，批号2009 0901。氯霉素(chloramphenicol injection)由天津药业焦作有限公司生产，批号：05022821。

1.1.2 实验仪器：BJ-6B-X直线加速器(北京医疗器械公司)，XT2000i全自动血液分析仪(日本Sysmex公司)，COVER-015显微镜(日本 Olympus公司)。

1.1.3 实验动物：Wistar大鼠，雌性，体重180g～220g，吉林大学基础医学院动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(吉)2007-0003。

1.2 实验方法

1.2.1 造模方法：将44只Wistar雌性大鼠禁食不禁水12h后按体重随机分为对照组、模型A组(A组)、模型B组(B组)等3组。其中对照组8只，A组和B组各18只。造模第1天，A组以直线加速器照射剂量率为240cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2min，分别于第4、6、8天腹腔注射环磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次。B组参照文献方法［2-3］，于造模第1天以直线加速器照射剂量率 300cGy/min，SSD=100cm，全身照射 1.2m in，第4天、5天、6天腹腔注射环磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次。对照组第1天铅砖屏蔽假照射。在造模期间观察大鼠进食量、进水量、毛发光泽、出血点及死亡等一般状况。于造模第9天、12天、15天，A组、B组各随机抽取6只，腹主动脉采血检测白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)、网织红细胞计数(Ret #)，取股骨做骨髓活检。

1.2.2 再障模型判断标准：外周血三系细胞减少，RET减少，骨髓活检示骨髓增生或减低(造血细胞容量40%)，非造血细胞(脂肪细胞)增多，脾脏萎缩或不明显改变，可判定为AA模型［2，4］。

1.2.3 统计学方法：本实验数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析处理，数据以±s表示，采用 F检验。

2 结果

2.1 一般体征

与空白对照组相比，模型组大鼠自6d起陆续出现皮毛松弛蓬乱，光泽度降低，部分大鼠有脱毛及皮损。消瘦、摄食减少、精神不佳，唇色眼睑苍白、活动减少，足底、鼻部出现瘀斑等症状。以上表现B组比A组严重。于造模第11天B组出现2只大鼠死亡。

2.2 骨髓活检

模型组与对照组比较，再障模型骨髓脂肪细胞增多，骨髓有核细胞增生减低，红细胞系、粒细胞系明显减少，无巨核细胞，网状细胞等非造血细胞易见(图1～4，见彩插2)。

2.3 模型外周血象变化

从表1可见，于造模第9天与对照组比较A组、B组 WBC、RBC、PLT、HGB、RET均明显降低，差异有显著性(P＜0.05)。于造模第15天，A组RBC、HGB值继续下降，WBC、PLT、RET值回升，与对照组比较降低，差异有显著性(P＜0.05)；B组WBC、RBC、HGB、PLT值有显著回升，与对照组比较降低，差异有显著性(P＜0.05)，RET值与对照组比较升高，差异有显著性(P＜0.05)。

表1 各组外周血象变化的比较 (±s，n=6)Tab.1 Comparison of peripheral blood picture in the three groups(±s，n=6)

表1 各组外周血象变化的比较 (±s，n=6)Tab.1 Comparison of peripheral blood picture in the three groups(±s，n=6)

注：与对照组比较，1)P＜0.01；A组与B组比较，2)P＜0.05、3)P＜0.01。Note：Compared with the control group，1)P＜0.01，Compared between groups A and B，2)P＜0.05、3)P＜0.01。

组别Groups天Days白细胞WBC 109/L红细胞RBC 1012/L血红蛋白HGB g/L血小板PLT 109/L网织红细胞计数RET#109/L对照组Control 8.58±0.92 7.96±0.29 142.8±4.12 903.4±25.6 256.5±85.5A组 9 0.18±0.0261) 6.40±0.301) 120.5±9.481) 104.5±11.71) 5.63±1.591) B组 9 0.082±0.031)3) 6.63±0.221) 122.67±2.751) 130.3±2.981)3) 9.6±1.011)3) A组 12 0.25±0.0691) 5.58±0.381) 109.3±5.931) 24.3±4.611) 39.67±9.781) B组 12 1.07±0.321)3) 5.93±0.251)3) 106.7±6.991)3) 88.5±20.81)3) 76.3±11.91)3) A组 15 1.82±0.16 5.23±0.361) 94.1±7.921) 458.7±32.41) 167.6±22.01) B组 15 2.31±0.391)2) 6.12±0.491)3) 119.7±7.611)3) 563.2±30.61)3) 602.5±40.91)3)

3 讨论

再生障碍性贫血是由苯及其衍生物、有机磷农药、氯霉素、抗肿瘤药等化学物品、药物和辐射，生物因素造成的骨髓造血功能衰退，导致红细胞、白细胞和血小板等全血细胞减少引起的一组综合征。复合法建立的再障动物模型病理与人类病理改变相似，且有方法简便、成功率高的优点，适合治疗药物的筛选。复合法主要采用放射线、Cy、CH共同作用引起造血细胞损伤，抑制骨髓细胞的再生，导致骨髓造血功能的衰竭。由于以上因素的干预剂量、方法、时间的不同模型诱发的成功率、再障期的稳定性、造模的周期、死亡率都有不同。通过对比研究表明，采用直线加速器照射剂量率为 240cGy/m in，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天开始隔日腹腔注射环磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法与采用直线加速器照射剂量率300cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天开始连续腹腔注射环磷酰胺 35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法比较，后者于造模第9天WBC和RET急剧下降，自第12天起快速回升，特别是RET值到第15天时已超过对照组的2.5倍。表明该造模方法缺乏稳定性。前者自第9天至第15天各项指标相对稳定，且无死亡。认为直线加速器照射剂量率为240cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天开始隔日腹腔注射环磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法具有复制周期短、成功率高、重复性好的优点。适合用于治疗药物研究的实验。

［1］王永才.最新血液骨髓细胞诊断学教学医用多媒体图谱［M］.人民军医出版社，2007：218.

［2］孙纪元，王四旺，谢艳华，等.再生障碍性贫血的动物模型实验研究［J］.中国实验动物学杂志，2000，10：210.

［3］陈慧莉，李建华，王海霞，等.愈障汤对再生障碍性贫血大鼠骨髓细胞超微结构的影响 ［J］.潍坊医学院学报，2007，29：487.

［4］张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准第三版［S］.科学出版社，2007：8：19-20.