C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF在乳腺癌中的表达及相关性

张继运 沙新海 于明涛

乳腺癌是1种严重威胁妇女健康的恶性肿瘤，其发生、发展和转移是1个极其复杂的生物学过程，是多因素、多基因、多步骤突变的结果[1]。本研究采用免疫组化方法检测乳腺癌组织中C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF的表达，探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系，进而探讨它们之间的相互关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院2010年1月～2011年12月诊治的72例乳腺癌标本。患者均为女性，年龄23～76岁、中位年龄47岁。术前患者均未做放、化疗。72例中浸润性导管癌34例，浸润性小叶癌4例，单纯癌17例，髓样癌8例，硬癌6例，黏液腺癌3例。乳腺癌Ⅰ期20例，Ⅱ期33例，Ⅲ期19例。肿瘤大小≤2 cm 26例，>2 cm 46例。有腋窝淋巴结转移42例，无腋窝淋巴结转移30例。

1.2 方法

所有标本经4%中性甲醛固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，4 μm连续切片，免疫组化染色均选用福州迈新公司SP试剂盒，免疫组化染色用PBS代替一抗作阴性对照，光学显微镜下观察着色反应。

1.3 结果判定

C-erbB-2蛋白以细胞膜或细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性判定标准；VEGF、p53蛋白均以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性判定标准。光学显微镜下观察：以细胞膜及细胞核出现棕黄色或棕色颗粒的细胞作为阳性细胞，根据整张切片中阳性细胞占全部细胞的比例定为：100个高倍视野阳性着色细胞数<10%为"-"；阳性细胞数10%～30%为"+"；阳性细胞数31% ～50%为"++";阳性细胞数>50%为"+++"。Ki-67定位于肿瘤细胞核，呈棕黄色。根据阳性肿瘤细胞数的比例分：不着色为(-)，<10%为(+)，10%～50%为(++)，>50%为(+++)；Ki-67>10%为阳性表达。

1.4 统计学方法

将实验结果整理后建立数据库，应用SPSS 17.0软件进行统计分析，计数资料比较采用χ2检验。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF 在乳腺癌组织中的表达

C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF在乳腺癌组织中阳性表达率分别为47.2%、48.6%、56.9%、65.3%。C-erbB-2表达与淋巴结转移、ER、PR有关；p53表达与肿块大小无关，与淋巴结转移、ER、PR有关；Ki-67、VEGF表达与肿块大小、淋巴结转移显著相关，但与ER、PR无关，见表1。

2.2 C-erbB-2、p53、Ki-67、VEGF、ER及PR之间的相关性

Spearman相关性分析发现,,ER和PR呈正相关；C-erbB-2与ER、PR呈负相关 ；p53与ER和PR呈负相关，p53、Ki-67、VEGF之间均呈正相关，见表2。

表1 C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF 表达与临床病理特征的关系(例)

表2 C-erbB-2、p53、Ki-67、VEGF、ER、PR之间的相关系数

注：▲▲为P<0.01 ，▲为P<0.05

3 讨论

乳腺癌是危害妇女健康的常见恶性肿瘤之一。在乳腺癌的发生、发展过程中诸多因素可以影响肿瘤细胞的生物学行为。传统判断乳腺癌预后的指标有年龄、月经状况、肿瘤大小、淋巴结转移情况、组织分类分级、雌激素受体表达情况等。将传统预测指标与分子生物指标相结合能更好地预测乳腺癌患者的生存率[2]。

本研究中ER和PR呈正相关，与文献报道一致。同时我们还发现，C-erbB-2过度表达与ER、PR阳性表达呈负相关，提示ER、PR和C-erbB-2信号转导通路上存在某些关联[3]。ER在雌激素作用下可抑制C-erbB-2表达,当ER表达下降时，C-erbB-2表达增强，C-erbB-2过度表达可阻止内分泌治疗的反应。

本研究乳腺癌组织中C-erbB-2的阳性表达率为47.2%，且C-erbB-2的表达与淋巴结转移、雌孕激素受体均有相关性，说明有淋巴结转移或雌、孕激素受体阴性患者C-erbB-2的阳性表达率更高。C-erbB-2被认为是与乳腺癌发生发展密切相关的原癌基因[4]，参与调控细胞生长增殖、分化，其产物过度表达提示恶性程度高、复发率高，具有更强的侵袭转移能力，预后差。

本研究显示，p53的阳性表达率为48.6%，p53与ER、PR负相关。p53基因突变与乳腺癌的发生密切相关。野生型p53是隐性抑癌基因，在细胞的生长过程中扮演着“分子警察”的角色，对细胞基因的完整性起着监督作用[5,6]。p53基因在有淋巴结转移的乳腺癌组织中表达更高，是判断乳腺癌预后的良好指标。Mao等[7]亦证实p53和ER呈负相关。p53能正向激活EGFR的表达而促进细胞增殖；可增加ER和EGFR/HER-2旁路途径，抵抗4-羟基三苯氧胺(OHT)细胞毒性作用[8]，影响内分泌治疗，但目前仍认为其不是1个独立判断预后的指标。

本研究显示，Ki-67的阳性表达率为56.9%，Ki-67表达情况与原发灶的大小及淋巴结转移密切相关，Ki-67与VEGF 呈正相关。Ki-67抗原是细胞增殖相关蛋白，仅在增殖细胞核中表达，被认为是较理想的检测细胞增殖活性的指标，用以指导乳腺癌的治疗。Ki-67是1种与细胞增殖有关的核抗原，也是目前较常用的核增殖标记物[9,10]，Ki-67阳性表达者预后不良。

本研究显示，VEGF在乳腺癌组织中的阳性表达率为65.3%，在有淋巴结转移及肿瘤体积较大的癌组织中阳性表达率更高，VEGF是最强的促血管内皮细胞分裂剂，血管生成对肿瘤的发生、侵袭和转移至关重要，是肿瘤增殖与发生转移的主要影响因素。VEGF高表达增加了瘤细胞转移的危险性[11]，故认为VEGF可以作为判断乳腺癌预后的指标之一。

总之，检测CerbB-2、p53、Ki-67、VEGF的突变对乳腺癌恶性程度、肿瘤的增殖能力以及预后的判断均具有重要意义[12]，联合雌孕激素受体检测有利于更好地评估乳腺癌的生物学行为及增殖活性，提高对乳腺癌患者预后判断的准确性，并对临床治疗有重要的指导意义。

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