PPARγ mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌预后的关系

李 强 党诚学

胃癌是常见的恶性肿瘤，目前胃癌手术后的预后不佳，严重危害着人类健康。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是一类核转录因子，包括PPARα、PPARβ及PPARγ 3种亚型。近年来研究表明，PPARγ具有调控肿瘤细胞分化，抑制肿瘤细胞增殖的作用。PPARγ与胃癌发生、发展及预后的关系，目前研究较少。本研究采用实时定量PCR检测胃癌组织和正常切缘胃组织中PPARγmRNA的表达，并结合胃癌患者的临床病理特征及生存资料，探讨PPARγ mRNA在胃癌发生、发展及预后中的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2004年5月～2010年5月陕西省肿瘤医院就诊的胃癌手术患者53例作为研究对象。胃癌标本手术切除后立即取胃癌组织、正常切缘胃组织，快速放置在液氮罐中，-80℃冰箱保存备用。胃癌组织标本及正常切缘胃组织均经术后病理检查证实。53例胃癌患者中，男性38例，女性15例；年龄33～67岁，中位年龄55岁。根据国际抗癌联盟(UICC) 第6版胃癌TNM分期标准，Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期5例；淋巴结转移41例，无转移12例。所有患者均行根治性切除，术前均未行放、化疗，术后行2～6个周期辅助化疗，中位化疗周期数为4个周期。对53例胃癌患者进行随访，手术治疗时间作为生存的起始时间，随访结束时间作为终止时间，以死亡作为结局事件。结局事件发生的时间与起始时间之间的时间间隔定义为患者的生存时间。随访截止到2011年5月。采取电话和信件随访。

1.2 实验方法

1.2.1 RNA提取和cDNA合成 采用RNAfast200试剂盒提取完整的RNA，按照Ferments(MBI)公司的逆转录试剂盒合成cDNA。

1.2.2 PPARγ mRNA检测 按 Realtime PCR Master Mix (ferments)试剂盒操作说明，在实时PCR仪上进行检测。以cDNA为模板扩增PPARγ mRNA和β-actin基因。反应体系SYBR Green Realtime PCR Master Mix(2×)12.5 μl，正向引物0.5 μl，反向引物0.5 μl，模板DNA 2 μl，加水至25 μl。PPARγmRNA扩增引物：上游引物5’-TGGAATTAGATGACAGCGACTTGG -3’，下游引物5’-AGGACTCAGGGTGGTTCAGC-3’；β-actin扩增引物：上游引物5’-ATCGTGCGTGACATTAAGGAGAAG-3’,下游引物5’-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。反应条件：50℃ 2 min，95℃ 10 min,95℃ 15 s,60℃ 30 s，72℃ 30 s，共40个循环。

1.2.3 数据处理 用2-△△Ct法处理实时定量PCR所测数值(Ct值)，得出PPARγmRNA相对表达量，△△Ct=△Ct实验组-△Ct对照组；△Ct=△CtPPARγ-△Ctβ-actin。2-△△Ct≥2为高表达，反之为低表达。

1.3 统计学方法

应用SPSS16.0统计学软件进行统计分析，利用配对t检验分析胃癌组织和切缘正常胃组织中PPARγ mRNA表达,独立样本的t检验分析胃癌组织中PPARγ mRNA表达与临床病理特征之间的关系，采用Kaplan—Meier和log rank进行生存分析，显著性检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 PPARγ mRNA 在胃癌组织中的表达

胃癌组织中PPARγ mRNA表达水平为(3.14±2.80)，较切缘正常胃组织(1.03±0.27)高，差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌中PPARγ mRNA高表达30例，高表达率为56.6%；PPARγ mRNA低表达23例，低表达率为43.4%。

2.2 胃癌组织中PPARγ mRNA表达与临床病理参数的关系

胃癌组织中PPARγ mRNA表达量与胃癌的TNM分期有关(P=0.027)，与患者性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小及分化程度无关(P>0.05)(表 1)。

表1 胃癌组织中PPARγmRNA表达与临床病理参数的关系

2.3 PPARγ mRNA与胃癌患者预后的关系

53例胃癌患者平均中位生存时间为47个月，PPARγ mRNA高表达的胃癌患者中位生存时间为60个月，PPARγ mRNA低表达的胃癌患者中位生存时间为36个月。Kaplan-Meier曲线分析(图1)。Log-rank检验表明，PPARγ mRNA高表达患者的生存率高于低表达者(P=0.015)。

图1 胃癌PPARγ mRNA不同表达水平组患者的生存曲线(月)

3 讨论

胃癌是常见的恶性肿瘤，2008年全世界新增胃癌患者，占全部肿瘤的7.8%[1]。目前，胃癌患者的主要治疗手段是手术治疗，但患者术后的生存期并不乐观，其死亡率仅次于肺癌、肝癌，全球每年新发胃癌病例41%发生在中国；中国占全球每年胃癌死亡人数的35%[2]。

近年来,胃癌的分子生物学和发病机制的研究揭示了胃癌是1种异质性肿瘤,肿瘤的个体化治疗日益受到重视。传统的胃癌预后指标TNM分期，已无法满足个体化治疗的要求。

随着分子生物学的研究进展，过氧化物酶体增殖物激活受体( PPARs)与肿瘤的关系越来越引起人们的重视。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)，是一类核转录超家族,它对基因的表达具有调节和转录作用，因而它调节着多种生理过程，在一些疾病中扮演着重要角色。它包括PPARα、PPARβ及PPARγ 3种亚型。它们分布在不同的组织中，具有调节细胞的生长、分化、凋亡和代谢平衡等多种生物功能。PPARγ是核受体超家族的成员，当被配体激活并与维甲类X受体(retinoid X receptor，RXR)形成异二聚体后，可以结合位于目标基因上游的过氧化物酶增殖体反应元件( peroxisome proliferating response element，PPRE)，调节基因转录。

PPARγ在乳腺、结肠、肺、卵巢、前列腺，甲状腺等多种组织中表达。文献报道PPARγ活化后，通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻滞细胞周期等作用来发挥肿瘤的抑制效应[3]。

目前对于PPARγ mRNA与胃癌的生物学特性及预后之间的关系研究较少。我们采用real-time PCR定量方法测定PPARγ mRNA在胃癌中的表达，结果显示PPARγ mRNA在胃癌组织中的表达明显高于正常组织，与王丽萍[4]、Yao[5]报道的一致。我们的研究结果表明PPARγmRNA的表达量与TNM分期有关，和患者的性别、年龄、组织分化、肿瘤大小和淋巴结转移无关。以上研究结果提示：PPARγ与肿瘤的发生、肿瘤的进展有关。

我们通过对PPARγ mRNA表达量和胃癌手术后生存期的研究发现，PPARγ mRNA表达量高的患者中位生存期为60个月，PPARγ mRNA表达量低的患者中位生存期达36个月，差异有统计学意义(P<0.05)。国外学者在对结肠癌、肺癌、舌癌[6，7]的研究中发现PPARγ高表达肿瘤患者预后较低表达者好。这表明，PPARγ mRNA表达水平对判断胃癌预后有重要的临床意义，是1个有价值的预后指标。

PPAR-γ激动剂在肿瘤细胞系中已经显示出抗肿瘤增殖作用[8，9]。研究表明PPARγ通过多种途径发挥肿瘤抑制效应，主要包括:①阻滞细胞周期；②诱导细胞凋亡；③抑制炎症反应和血管生成；④抑制肿瘤侵袭和转移。临床研究[10,11]也显示接受PPARγ激活剂治疗的患者，发生肺癌的风险低，提示PPARγ具有保护作用。

综上所述，胃癌组织中PPARγ mRNA的表达与胃癌的分期和预后密切相关，PPARγmRNA在胃癌组织中的表达，有可能成为1个有用的预后指标，对胃癌的发展和预后做出准确的判断，同时发挥化学预防和治疗的作用，更好地进行胃癌的个体化治疗。

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