EB病毒感染的免疫血清学检测与生物学测定在鼻咽癌中的临床应用价值

马德佳，何新发，李燕妮

（玉林市红十字会医院检验科，广西 玉林 537000）

人类疱疹病毒(EB病毒)是一种重要的感染人类的DNA病毒，它通过密切接触而感染人类，它在全球普遍存在，90%以上的人在3～5岁就感染过EB病毒，它不仅与中国南方鼻咽癌(NPC)有关，还与淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、系统性红斑狼疮和免疫功能降低后的淋巴增生性疾病有关[1]，而且正常人群也有一定程度的阳性率，所以多数EB病毒抗体阳性者也未必是NPC患者，且不一定发生NPC[2]。多数学者认为EB病毒可能是恶性淋巴瘤和鼻咽癌的病因[3]。NPC多见于中国南方，全球80%的NPC发生在中国南方和东南亚地区，与EB病毒感染、遗传及环境因素关系十分密切；EB病毒的血清学特异抗体及生物学EBV-DNA的升高往往在临床发现肿瘤之前，NPC的早期诊断与临床分期对放疗的疗效意义重大，病期越早疗效越高。目前用于NPC血清学及生物学辅助诊断与监测的指标较多，但大部分对早期诊断、临床分期、疗效监测和预后判断应用价值不大。本研究探讨和评价4种最常用的EB病毒抗体及EBV-DNA含量单独检测以何者为良，以及采用何种优化组合在早期诊断、临床分期、疗效监测、转移、复发和预后判断中最实用、最客观、最具代表性、最有效，以期提高EB病毒血清学及生物学在NPC中的临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本 2006～2009年本院收治的168例(其中男133例，女35例，年龄25～74岁，平均45岁)未经治疗过的病理确诊的NPC患者、124例其他疾病患者(其中鼻息肉40例，慢性鼻咽炎30例，颈部淋巴结炎14例，头颈部恶性淋巴瘤40例)和174例(男151例，女23例，年龄23～70岁，平均42岁)经全面体检证实健康的成年人血清和血浆。

1.2 方法 ELISA法检测EBNA1-IgA、Zta-IgA、VCA-IgA试剂均由广东省中山生物工程有限公司神农有限公司提供；ELISA法检测EA-IgA试剂由北京贝尔生物工程有限公司提供；荧光定量PCR法检测血浆EBV-DNA试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供；检测与测定的操作严格按试剂盒说明书进行，检测仪器为雷杜RT-6000酶标仪、达安PCR分析仪。

1.3 临界值的确定 根据168例鼻咽癌患者和174例健康成年人血清或血浆在不同相对吸光度值或病毒拷贝数所计算出的灵敏度和特异性绘出两条曲线，按照交接点的所在确定为临界值，大于临界值即为阳性。

1.4 统计学分析 计数资料率的比较用χ2检验，使用SPSS12.0统计软件进行数据的分析统计。

2 结果

2.1 不同人群4种最常用的EBV抗体和EBV-DNA的可疑阳性、阳性人群情况 4种最常用的EBV抗体和EBV-DNA的阳性人群鼻咽癌组分别与鼻息肉组，慢性鼻咽炎组、颈部淋巴结炎组及正常成年人对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)；但与头颈部恶性淋巴瘤组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

2.2 4种最常用的EBV抗体和EBV-DNA的单项检测的敏感度(或灵敏度)、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和优势比 血浆EBV-DNA的敏感度为93.1%，特异度为97.6%；血清学的EBNA1-IgA的敏感度为93.0%，特异度为93.1%最高，见表2。

2.3 4种最常用的EBV抗体两两与EBV-DNA联合检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、优势比 EBNA1-IgA和Zta-IgA与EBV-DNA联合检测的敏感度为91.33%，特异度为97.6%，阳性预测值为0.9789，阴性预测值为0.8016，阳性似然比为86.1875，优势比为826.0000(效果最佳)，见表3。

表1 不同人群4种最常用的EBV抗体和EBV-DNA的可疑阳性、阳性人群情况比较[例(%)]

表2 4种最常用的EBV抗体和EBV-DNA的单项检测结果

表3 4种最常用的EBV抗体两两与EBV-DNA联合检测结果比较

3 讨论

与EBV感染有关的疾病很多，NPC与EBV感染关系特别密切，多数学者认为EBV可能是恶性淋巴瘤和鼻咽癌的病因。

近年来，随着诊疗技术的提高，NPC的诊断和治疗有了很大的进展，5年生存率大大提高，但由于早期诊断、临床分期、疗效判断和预后预测等方面仍不够理想，而NPC的早期诊断与临床分期对放疗的疗效意义重大，病期越早，疗效越高，病期越晚，疗效越低。近年来的研究表明，与EBV感染相关的免疫血清学与生物学标志产物作为NPC早期筛查、辅助诊断、临床分期、疗效判断和预后预测有着独特的优势。

正常人群EBV的血清学与生物学标志产物有一定程度的阳性率，绝大多数NPC癌细胞内寄居了EBV，所以健康成人与NPC患者不能依靠血清或血浆中是否有EBV抗体或EBV-DNA作为鉴别依据，况且各种EBV抗体存在不同水平的灵敏度和特异度，要看EBV感染的类别和抗体、EBV-DNA水平的高低，甚至鼻咽部恶性淋巴瘤EBV抗体及EBV-DNA也有较高的阳性人群，对EBV的血清学与生物学标志产物阳性率高的要有充分可靠的手段予以确认。

EBV感染B淋巴细胞分为潜伏感染和溶解性感染两种，潜伏感染有三型，三型感染都表达EBNA1抗原，所以选用EBNA1抗原免疫应答产生的各类抗体作为EBV感染的血清学指标最具代表意义。

EBV感染产生的IgG类抗体因为半衰期长，即使健康成人或EBV被彻底清除也会有较长时间较高滴度的IgG类抗体，在NPC的辅助诊断方面没什么价值；而IgA类抗体往往水平较高，针对性或特异性较强，所以在临床中建议NPC的辅助诊断应用IgA类血清学抗体。

1976年Henle等[4]就指出，NPC患者血清中具有多种和较广的抗EBV抗体谱。血清学的免疫抗体检测已广泛的应用于NPC的诊断与筛查[5-6]，由于NPC的主要表现是EBV潜伏感染出现三个时相，首先表达即早期抗原Zta，接着表达早期抗原EA，最后淋巴细胞的核膜破裂，合成表达了衣壳抗原VCA及膜抗原MA，这一过程有部分会出现流产，不产生衣壳抗原及膜抗原，释放出来的EBV合成完整的病毒颗粒后又吸附和侵入B淋巴细胞及其他细胞，在这一转化过程中病毒基因组被扩大。由此可见，传统上选用VCA或MA抗原免疫应答产生的各类抗体作为EBV感染筛查试验指标有一定缺陷，而选用Zta抗原免疫应答产生的各类抗体可作为EBV从潜伏期感染到溶解性感染转折点的血清学指标，优于VCA。本研究显示Zta的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、优势比均高于VCA。

此外，VCA-IgA抗体和EA-IgA抗体在体内半衰期较长，即使体内EBV被消除，仍有较长时间存在较高滴度，不能实时反映肿瘤的消长情况。尚无证据可显示，它们作为监测NPC治疗后转移、复发的指标，且与NPC分期无明显相关[7]。血浆EBV-DNA水平对NPC的诊断、转移、复发和预后的预测均有一定意义[8]。本研究也显示EBV-DNA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、优势比等临床应用价值指标均为最高。

因为对EBV病原的测定操作要求高，设备及试剂昂贵等，应用受到限制，EBV感染的免疫血清学检测仍是目前NPC早期筛查、早期诊断最常用的手段。由于NPC主要表现是EBV潜伏感染伴小量溶解性感染，传统VCA和EA免疫荧光法或免疫酶法(选用溶解性感染的表达抗原)显而易见，针对性不强，而且难以确定两个滴度之间更微小的数值，结果判断上欠客观。而新一代的EBV-IgA ELISA试剂盒选用了潜伏感染的主要表达抗原EBNA1，克服了传统方法及血清学指标的不足，血浆游离EBV-DNA更具优势，为NPC的早期发现、早期诊断、临床分期、疗效监测和预后判断提供更高价值的手段。

基于NPC患者EBV血清学及生物学的特点以及方法学的局限性，血清学与生物学指标的单项检测在正常人群和NPC中存在不同程度的假阳性、假阴性，即不同水平的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值，选择最有效的单项或联合检测为临床提供更有价值的手段尤为必要，检测EBNA1-IgA、VCA-IgA、EA-IgA、Zta-IgA、EBV-DNA有互补作用[9]。本研究显示单项的EBNA1-IgA和血浆EBV-DNA定量检测价值最高，而EBNA1-IgA、Zta-IgA、EBV-DNA定量联合检测进一步提高了阳性预测值、阳性似然比和优势比，这一组合大大地减少漏检和误检，最为客观，最具代表性且最有效。

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