萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠含量

姜国亮

萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠含量

姜国亮

目的总结萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠含量经验。方法采用萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠的含量,并对其线性关系、精密度、稳定性和回收率进行研究,且与气相色谱法进行比较。结果萃取法与气相色谱法差异无统计学意义(P＞0.05)。结论该方法简单快捷,结果可靠,可用于人血白蛋白的半成品中辛酸钠的含量控制。

辛酸钠;萃取法;气相色谱法

《中国药典》采用气相色谱法控制其含量[1],但此方法制品测定前需做繁琐的处理,检测周期过长,对于等待分装的半成品显然不可取。本作者采用经典萃取法,利用辛酸钠为有机弱酸强碱盐的化学性质及在两种溶剂中分配系数的不同,分离出辛酸,然后进行酸碱滴定,测其含量。

1 仪器与试剂

0.04mol/L的辛酸钠标准溶液(辛酸钠,北京师化精细化工),混合溶解液(无水乙醇-吐温聚山梨醇酯 80-水(5∶0.5∶94.5,v/v),乙醚,正丁纯,1mol/L盐酸溶液,标准0.01mol/L氢氧化钠滴定液,1%酚酞指示液。本实验所用试剂均为分析纯。

2 操作

2.1 方法 将 19ml纯化水加入到 250m l分液漏斗中,再准确加入约 20%(C)的白蛋白溶液 1ml(V 1),然后加入 1mol/L盐酸溶液 0.2ml,摇匀后加入 15ml乙醚及 1m l正丁醇,震振荡 15s,静置分层后,弃掉下部水层,然后将醚层用 15m l纯化水震振荡洗涤 2次,分层后将醚层转入到 100ml的锥形瓶中。再用 15m l混合溶解液置前述分液漏斗中,轻轻摇荡充分洗涤分液漏斗内壁后,将混合溶解液合并转入前述锥形瓶中,混匀,加入 1%酚酞指示液 2～3滴,然后用标准氢氧化钠滴定液(0.01mol/L)(N)滴定至淡粉红色即终点,记录消耗体积数(V)。同时用纯化水 1ml同法操作所得的萃取液消耗标准氢氧化钠滴定液(0.01mol/L)(N)数作空白(V)。

Pr为蛋白质

3 结果

3.1 线性关系 将 20%样品依次取 0.6,0.8,1.0,1.2,14,1.6m l进行操作,消耗 0.01mol/L氢氧化钠滴定液的体积差分别为 1.9,2.6,3.2,3.9,4.5,5.1m l。将其线性回归得:Y=3.2X+0.01332,r=0.9995。表明辛酸钠的含量在 0.095～0.255mmol/g·Pr范围内具有良好线性关系。

3.2 精密度 取同一批样品分成 6份按上述萃取法操作 6次。结果表1

表1 精密度及重现性稳定性试验结果[mol/(g·Pr)]

3.3 回收率 取已知样品按 0.160mol/g·Pr准确加入标准辛酸钠进行 6次实验取平均值,回收率值为 99.5%,RSD值为 1.41%。

3.4 4批成品辛酸钠的含量测定结果比较,如表2。

表2 含量测定及中检所气相色谱法所测的结果比较[mol/(g·Pr)]

4 讨论

室温若高于 30℃,萃取 时特别容易乳化,影响结果,本实验均在 20℃～30℃室温进行。萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠的含量简便易行快捷其精密度及重现性稳定性试验RSD均小于 2%,且与中检所气相色谱法比较,P＞0.05,差异无统计学意义,结果可靠,方法简便,值得推广。

[1] 国家药典委员会.中国药典.中国医药科技出版社,2010.

344000江西博雅生物制药股份有限公司