高效液相色谱法测定玉米面馒头中着色剂柠檬黄

刘长勇 罗小玲 郝家勇 罗瑞峰

(农业部食品质量监督检验测试中心，石河子 832000)

玉米面馒头是时下较为流行的粗粮食品，深受广大消费者喜爱。据报道，一些地区不法商贩为了牟利，在加工玉米面馒头时，非法添加合成着色剂柠檬黄。人体食用过量的柠檬黄可造成危害[1-3]。测定柠檬黄的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱、液相色谱-质谱法、滴定法[4-6]，在这些方法中没有说明发酵面食制品馒头中柠檬黄的测定方法，且国标方法中聚酰胺粉难以将柠檬黄完全吸附，样品回收率较低[3]。为此笔者做了多次实验建立了玉米面馒头中柠檬黄含量的测定方法。该方法简便、快捷、准确，可满足检测要求。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Waters 2695型，配Waters 2487型紫外检测器，美国Waters公司；

甲醇：色谱纯;

乙酸铵溶液：0.02 mol/L，称取乙酸铵0.770 8 g，加水定容至 500 mL，过0.45 μm微孔滤膜，再用微波除气泡后备用；

柠檬黄标准储备液：1 000 μg/mL，准确称取干燥的柠檬黄标准品0.100 0 g，加甲醇-乙酸铵(体积比18∶72)使之溶解，定容至100 mL，混匀；

柠檬黄标准使用液：20 μg/mL，准确吸取1 mL柠檬黄标准储备液加流动相定容到50 mL，混匀。

1.2 色谱条件

色谱柱：Symmetry Shield RP18(3.9 mm×150 mm, 5 μm) ；柱温：室温；流动相：甲醇-乙酸铵 (体积比18∶72)，流速为0.6 mL/ min；紫外检测器，检测波长：254 nm 。

1.3 样品处理

称取制备好样品5 g(准确到0.01 g)于高型烧杯中，准确加入50 mL流动相，匀浆均质2 min，保鲜膜封口超声萃取10 min，使色素充分溶出，静置沉淀，取上层提取液适量离心。取离心上清液过 0.45 μm滤膜。

1.4 测定方法

柠檬黄标准溶液进样量为4、8、12、16、20 μL，以柠檬黄浓度X为横坐标、峰面积Y为纵坐标进行线性拟合。样品提取液进样量为20 μL。外标法保留时间定性，峰面积定量。

2 结果与讨论

2.1 标准品溶剂、流动相比例、样品提取液的选择

样品溶液pH值过高或过低都会降低色谱柱使用寿命并对仪器流动相通道有腐蚀作用[7]。试验证明，甲醇-乙酸铵(体积比18∶72)对柠檬黄的溶解性可满足实验要求，且标准品的峰型和保留时间达到了理想的效果。选择流动相为样品提取液直接提取目标物上机测定，达到了杂质与目标组分的良好分离，且避免了提取液与流动相成分不同可能造成的目标物与标准品保留时间的差异，以便更好地定性。该法与国标方法相比更省时、便捷，提高了工作效率。

2.2 标准曲线

按1.4方法绘制标准曲线，柠檬黄标准溶液色谱图见图1。柠檬黄的线性回归方程为Y=1.79×105X-1.66×105，相关系数r2=0.999 964。结果表明，柠檬黄在4～20 μg/mL浓度范围内，标准点呈良好的线性关系，不排除适量延伸后仍表现出良好线性的可能。

2.3 精密度与加标回收率

按1.2色谱条件对同一玉米面馒头样品平行测定7次，得出测定结果平均值、标准偏差及相对标准偏差，见表1。结果表明，测定结果的相对标准偏差小于 5%，满足分析化学要求。对不含目标物样品加标，加标量分别为0.05、0.10、0.20 μg/g，计算回收率，结果见表 2。由表2可见，回收率在95%～100%之间。

图1 柠檬黄标准液色谱图

表1 精密度试验结果(n=7)

表2 回收试验结果

2.4 样品测定

标准曲线点为4、8、12、16、 20 μL时，对样品中目标物含量在40～200 μg/g范围内，称样量为5 g，样品溶液测定浓度在曲线内；当样品中目标物含量在小于40 μg/g或大于200 μg/g时，可增减称样量、减增定容体积或延伸曲线。样品色谱图见图2。

图2 样品色谱图

3 结语

在笔者实验室条件下，通过对样品前处理、色谱条件选择的探讨，建立了高效液相色谱测定玉米面馒头中柠檬黄的方法。本方法简单、快速、准确，测定结果令人满意。

[1] 丁呈华，曹丰璞，杨浩，等.高效液相色谱法同时测定栀子黄、柠檬黄和日落黄色素[J]. 许昌学院学报, 2010,29(9)：101-102.

[2] 王冬妍，杨书宁.高效液相色谱法测定杏罐头中的柠檬黄、日落黄[J].食品研究与开发，2010,31(9)：134-135.

[3] 程小会,邓敬颂.液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄方法优化[J].化学分析计量, 2010,19(2)：70-71.

[4] GB/T 5009.35-2003 食品中合成着色剂的测定[S].

[5] SN/T 2105-2008 化妆品中柠檬黄和桔黄等乙酸铵溶性色素的测定方法[S].

[6] GB 4481.1-2010 食品添加剂柠檬黄[S].

[7] 陈伟东，王荔，孙冬梅.HPLC法测定肉制品中柠檬黄和胭脂红含量[J].肉品卫生，2000(3):13-14.